单宁含量检测试剂盒说明书(微量法）
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 75 mL×2 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 粉剂×1 瓶 | 常温保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、标准品：10 mg 单宁酸。临用前加入 1.175 mL 提取液溶解为 5000 nmol/mL 的标准液，2-8℃保存两周。
产品说明：
单宁又称植物多酚，是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。单宁可作为潜在的生物标记物；与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。其收敛性是多种生理活性的基础，如止血、抗肿瘤、抗衰老等生理活性，也是影响产品口感的因素之一。
根据光谱特性，单宁在275nm下有较强的紫外吸收，通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性质来检测单宁含量。
技术指标：
最低检出限：0.13 nmol/mL
线性范围：0.39-18 nmol/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、30-50目筛、蒸 馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50目筛之后，称取约0.05g，加入1mL提取液（封口膜封口防止液体溅出），于 70℃水浴，准确提取 30min，期间可摇晃数次。12000rpm，25℃，离心 10min，取上清，用提取液定容至 1mL， 待测。
二、测定步骤
- 紫外分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至275nm，紫外分光光度计提取液调零。
- 标准液的稀释：将标准液用提取液稀释为25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125nmol/mL标准溶液。
- 标准液稀释可参考下表：
序号 | 稀释前浓度（nmol/mL） | 标准液体积（μL） | 提取液体积（μL） | 稀释后浓度（nmol/mL） |
1 | 5000 | 100 | 900 | 500 |
2 | 500 | 100 | 1900 | 25 |
3 | 25 | 1000 | 1000 | 12.5 |
4 | 12.5 | 1000 | 1000 | 6.25 |
5 | 6.25 | 1000 | 1000 | 3.125 |
6 | 3.125 | 1000 | 1000 | 1.5625 |
7 | 1.5625 | 1000 | 1000 | 0.78125 |
备注：实验中每个标准管需 500μL 标准溶液。
- 加样表：
试剂名称 | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
试剂一 | 大约5-7mg | - | - | 大约5-7mg |
提取液 | - | - | - | 0.5m
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