总多糖含量测定试剂盒说明书 微量法（比色法）
注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号：UPLC-MS-5035
规格：100T/96S
产品内容：
试剂一：12mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：无水乙醇，自备。
试剂三：浓硫酸，自备。
标准品：粉剂10mg×1 支，4℃避光保存。
产品说明：
多糖是生物体中广泛存在的物质，是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物，它是生物体内重要的生物大分子，是维持生命活动正常运转的基本物质之一。
利用水提醇沉法提取总多糖，苯酚-硫酸法测定总多糖含量。
自备仪器和用品：
分析天平、酶标仪（可见分光光度计）、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、无水乙醇、浓硫酸、蒸馏水、水浴锅。
操作步骤：
一、总多糖提取
样本烘干粉碎，称取约0.05g 样本，加入1mL 水，充分匀浆。100℃水浴提取2h（必须盖紧盖子防止水分流失），冷却后10000g 离心10min，取上清。吸取0.2mL 上清，慢慢加入0.8mL 无水乙醇，混匀后4℃静置过夜，10000g 离心10min，弃上清，沉淀中加入1mL水，充分混匀溶解沉淀。
二、测定步骤
1、酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 490nm。
2、称1mg 标准品用 1mL 蒸馏水溶解，浓度为 1mg/mL。取适当溶液配制浓度为1mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg/mL、0.0625mg/mL 的标准品（蒸馏水进行稀释）。取 1.5mL EP 管吸取200μL 标准品，加入100μL 试剂一和0.5mL 浓硫酸，混匀后90℃水浴 20min，流水冷却。取200μL 加入酶标板，于490nm 下测定吸光值A。根据吸光度（x）和浓度（y，mg/mL） 做出标准曲线。
3、吸取200μL 上清，加入100μL 试剂一和0.5mL 浓硫酸，混匀后90℃水浴 20min，流水冷却。取200μL 加入酶标板，于490nm 下测定吸光值A。
三、总多糖含量计算
根据标准曲线，将样品△A 带入公式中（x），计算出样品浓度y（mg/mL）。
- 按样本鲜重计算
总多糖（mg /g 干重）=5y÷W
V 样总：上清液总体积，mL；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；W：样品质
量，g；样本体积已被稀释五倍，T。
注意事项：
- 如果样品吸光值A 大于 最大浓度标准品吸光值，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中再乘以相应稀释倍数。
- 由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作
