土壤无机磷（S-PHOS）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 50 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 11 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 粉剂×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂一：临用前用蒸馏水稀释 10 倍后再用；
2、 试剂三：临用前加入 20 mL 蒸馏水，充分溶解后加入 10 mL 试剂二，混匀；
3、 标准品： 40μg/mL 无机磷标准液。
产品说明：
磷是植物必需大量元素。植物主要通过根系从土壤中获取磷元素。土壤磷包括有机磷和无机磷。土壤有机磷 经过矿化分解而转化为无机磷，才能进一步被植物吸收利用。从土壤中提取无机磷，在酸性环境中，通过钼蓝法定磷，即可计算出无机磷含量。
技术指标：
最低检出限：0.5249 μg/mL
线性范围：2-80 μg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式水浴锅、分析天平、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、蒸馏水 和30-50目筛。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
取 10mL 离心管，加入称取的 30-50 目筛子过筛的风干土样约 0.1g，加入 10mL 试剂一，震荡混匀，然后置于
45℃水浴浸提 1h，8000rpm，室温，离心 10min，取上清液，待测。
二、测定步骤
- 分光光度计预热 30min 以上，调节波长到 660nm，蒸馏水调零。
- 打开水浴锅，调节温度到 40℃。
- 空白管：取 EP 管，依次加入 500μL 蒸馏水，500μL试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min
后于 660nm 测定吸光度，记为 A 空白管。空白管只需做 1-2 次。
- 标准管：取 EP 管，依次加入 50μL 标准液，450μL 蒸馏水，500μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min， 室温冷却 10min 后于 660nm 测定吸光度，记为 A 标准管。标准管只需做 1-2 次。
- 测定管：取 EP 管，依次加入 50μL 上清液，450μL 蒸馏水，500μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min， 室温冷却 10min 后于 660nm 测定吸光度，记为 A 测定管。
三、土壤无机磷含量计算
S-PHOS（μg/g 土壤）= [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷W
=400×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W C标准液：40μg/mL；V总：总上清液体积，10mL；W：土壤样本质量，g。
注意事项：
1、试剂三需临用前配制，限当天使用。试剂三配制过程中，可能会产生黑色固体，其不影响结果，注意吸取时不要将黑色固体吸入。
2、 如果吸光值大于 1 时，样本需用蒸馏水做相应稀释。
3、 需在 40min 内完成比色。
