植物硝态氮含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称 规格 保存条件
试剂一 粉剂×2 瓶 4℃保存
试剂二 液体 100 mL×1 瓶 4℃保存
标准品 粉剂×1 支 4℃保存
溶液的配制：
1、 试剂一：临用前根据用量每瓶加入 2 mL 浓硫酸充分溶解；配制好后尽快使用，4℃可保存一周。
2、 标准品：10 mg 硝酸钾，临用前加入 0.935 mL 蒸馏水溶解，配成 1400 μg/mL 的 NO3-N 标准液。
产品说明：
硝酸盐是植物吸收的主要含氮物质之一。硝酸盐在植物体内的还原部位不同，可以在根内，也可以在枝叶内进行，且因植物类别和环境条件而异。因此，测定植物体内硝态氮含量变化对了解氮代谢机制有重要的意义。
在浓酸条件下，NO -可以与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，后者在PH>12的条件下呈黄色，在一定范围内， 其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算硝态氮含量。
技术指标：
最低检出限：0.7534 μg/mL
线性范围：0.875-84 μg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、浓硫酸、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 蒸馏水）加入蒸馏水， 室温匀浆后置于 90℃恒温水浴锅中浸提 30min，期间不断晃动或者置于 90℃恒温摇床中振荡提取 30min，待冷却后于 25℃，12000g 离心 15min，取上清待测。
二、测定步骤
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至410nm，蒸馏水调零。
2.将1400μg/mL NO3-N标准液用蒸馏水50倍稀释成28μg/mL的标准溶液。
3.操作表：

试剂名称 测定管 对照管 标准管 空白管
样本（μL） 40 40
标准溶液（μL） 40
蒸馏水（μL） 60 40
试剂一（μL） 60 - 60 60
充分混匀，25℃静置30min
试剂二（μL） 1400 1400 1400 1400
混匀，涡旋振荡，使出现的沉淀充分溶解，取 1mL 于 1mL 玻璃比色皿中测定 410nm 处吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。
三、植物 NO3-N 的计算
1.按样本质量计算
NO3- N含量（μg/g 质量）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷W=28×ΔA÷ΔA标准÷W
2.按样本蛋白浓度计算
NO3- N含量（μg/mg prot）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷（Cpr×V提取）=28×ΔA÷ΔA标准÷Cpr
W：样本质量，g；C标准：标准溶液浓度，28μg/mL；V提取：样本总体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。
注意事项：
1.试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。
2.如果样本吸光值大于 1.4，建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。