维生素 B1（VB1）含量检测试剂盒说明书（微量法）
货号: UPLC-MS-4375
规格: 100/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 70 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
稀释液 | 液体 100 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 液体 2.5 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 3 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 3 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 液体 7 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂五 | 液体 4 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、提取液：内含不溶物，使用前摇匀；
2、标准品：10mg 维生素 B1。临用前加入 1mL 稀释液，配成 10mg/mL（即 10000μg/mL）的标准液。
产品说明：
维生素B1（Vitamin B1）又称硫胺素，以辅酶形式参与糖的分解代谢，在生物体能量代谢中有重要的作用。VB1在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾，亚铁氰化钾与Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝，测定布鲁
士蓝在704nm下的特征吸收峰，即可反映VB1的含量。
技术指标：
最低检出限：0.057 μg/mL
线性范围：1.953-250 μg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：将样本磨碎，按照质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 0.6mL 提取液）加入提取液，60℃浸提 30min，加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃，13000g 离心 10min，取上清测定（动物组织、豆类种子等蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟或反复离心 2-3 次至上清无浑浊）。
2、细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 0.6m
提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃，13000g 离心 10min，取上清测定。
3、液体：直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至704nm，蒸馏水调零。
2、 将10mg/mL（10000μg/mL）标准液用稀释液稀释为250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125μg/mL的标准溶液备用。
3、 操作表（在1.5mL EP管中进行下列操作）：
| 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本（μL） | 25 | - | - |
稀释液（μL） | - | - | 25 |
标准品溶液（μL） | - | 25 | - |
试剂一（μL） | 20 | 20 | 20 |
试剂二（μL） | 25 | 25 | 25 |
充分混匀，80℃水浴反应30min。 |
试剂三（μL） | 20 | 20 | 20 |
试剂四（μL） | 55 | 55 | 55 |
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