苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性检测试剂盒说明书

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。货号：MS-4457

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称 规格 保存条件

提取液 液体 110 mL×1 瓶 4℃保存

试剂一 液体 15 mL×1 瓶 4℃保存

试剂二 粉剂×2 瓶 4℃保存

试剂三 液体 1 mL×1 支 4℃保存

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前取 1 瓶加入 2.5 mL 蒸馏水充分溶解待用；现配现用，4℃可保存 2 周。

产品说明：

PAL（EC4. 3 1 5）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶和限速酶，在动物体内尚未发现。与一些重要的次生物质如木质素、类黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育、抗病、抗逆反应中起重要作用。

PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm 处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算 PAL 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者

增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 290nm，蒸馏水调零。

2、 操作表：（在 EP 管或 96 孔板中按顺序加入下列试剂）

试剂名称（μL） 测定管 空白管

样本 5

试剂一 145 150

试剂二 40 40

混匀，30℃  准确反应 30min

试剂三 10 10

混匀，静置 10min 后，290nm 处记录测定管吸光值 A1 和空白管吸光值 A2，ΔA=A1-A2。（空白管只需做 1-2 次）

三、PAL 活性计算

a、用微量石英比色皿测定的计算公式如下

（1） 按蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟使 290nm 下吸光值变化 0.1 定义为一个酶活性单位。PAL（U/mg prot）=ΔA×V 反总÷0.1÷（Cpr×V 样）÷T =13.33×ΔA÷Cpr

（2） 按按样本质量计算

单位的定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中分钟使 290nm 下吸光值变化 0.1 定义为一个酶活性单位。PAL（U/g 质量）=ΔA×V 反总÷0.1÷（V 样÷V 提取×W）÷T =13.33×ΔA÷W

V 样：加入样本体积，5?L=0.005mL；V 提取：加入提取液体积，1mL；V 反总：反应总体积，200?L=0.2mL；T： 反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

b、用 96 孔板测定的计算公式如下

（1） 按蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白在每mL 反应体系中每分钟使 290nm 下吸光值变化 0.05 定义为一个酶活性单位。PAL（U/mg prot）=ΔA×V 反总÷0.05÷（Cpr×V 样）÷T =26.67×ΔA÷Cpr

（2） 按按样本质量计算

单位的定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟使 290nm 下吸光值变化 0.05 定义为一个酶活性单位。PAL（U/g 质量）=ΔA×V 反总÷0.05÷（V 样÷V 提取×W）÷T =26.67×ΔA÷W

V 样：加入样本体积，5?L=0.005mL；V 提取：加入提取液体积，1mL；V 反总：反应总体积，200?L=0.2mL；T： 反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。