本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断 |
| 动物线粒体呼吸链复合物 I |
（NADH-辅酶 Q 还原酶）ELISA 检测试剂盒 |
|
| 使用说明书 |
检测原理 |
|
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预 |
先包被线粒体呼吸链复合物I（NADH-辅酶Q还原酶）抗体的包被微孔 |
中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底 |
洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并 |
在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的线粒体呼 |
吸链复合物I（NADH-辅酶Q还原酶）呈正相关。用酶标仪在450nm 波 |
长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。 |
样品收集、处理及保存方法 |
|
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞 |
刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地 |
分离。 |
2. | 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。 |
|
3. | 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。 |
|
4. | 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟 |
|
取上清。 |
|
5. | 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于 |
|
-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 |
|
自备物品 |
|
|
1. | 酶标仪（450nm） |
|
2. | 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL |
|
3. | 37℃恒温箱 |
|
操作注意事项 |
|
|
1. | 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的 |
|
浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解 |
|
后再使用。 |
|
|
|
|
|
|
|
|
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，最终结果乘以 5 才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 备注 |
|
|
|
|
微孔酶标板 | 12 孔×8 条 | 12 孔×4 条 | 无 |
|
|
|
|
标准品 | 0.3mL*6 管 | 0.3mL*6 管 | 无 |
|
|
|
|
样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
|
|
|
|
检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
|
|
|
|
20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
|
|
|
|
底物 A | 6mL | 3mL | 无 |
|
|
|
|
底物 B | 6mL | 3mL | 无 |
|
|
|
|
终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
|
|
|
|
封板膜 | 2 张 | 2 张 | 无 |
|
|
|
|
说明书 | 1 份 | 1 份 | 无 |
|
|
|
|
自封袋 | 1 个 | 1 个 | 无 |
|
|
|
|
注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1.5、3、6、12、24 U/mL
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
操作步骤
1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；
3. 样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去
洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。 |
6. | 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 |
7. | 每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 |
OD 值。 |
结果判断 |
|
绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应 |
OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样 |
本浓度值。 试剂盒性能 |
| 1. | 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值，大于等于 | 0.9900。 | 2. | 灵敏度：最低检测浓度小于 0.1 U/mL。 | 3. | 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 | 4. | 重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。 | 5. | 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。 | 6. | 有效期：6 个月 |
|
|
|
免责声明 1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所 产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。 2. 严格按照说明书操作，实验者违反说书操作，后果由实验 |
