β-木糖苷酶活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 50mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 粉剂×2 支 | -20℃保存 |
试剂二 | 液体 35 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体 35 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂一：临用前取 1 支加入 1 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂建议-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融；
2、标准品：5μmol/mL 对硝基苯酚溶液。
产品说明：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。
β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在 405nm 处有特征吸收峰，测定 405nm光吸收增加速率，可计算β-木糖苷酶活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、水浴锅、蒸馏水、超声破碎仪。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、植物样本：称取约 0.1g 样本，加 1mL 提取液，充分冰浴匀浆，然后 12000rpm，4℃，离心 20min，弃沉淀，
取 20μL 上清测定蛋白含量，剩余上清作为待测酶液。
2、细菌、真菌样本：收集约 500 万个细胞，加入 1mL 提取液，超声波破碎（冰浴，功率 200w，超声 3 秒，间隔7 秒，总时间 3min）；然后 10000rpm，4℃，离心 10min，弃沉淀 ，取 20μL 上清测定蛋白含量，剩余上清置于冰上待测。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计预热30min 以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零。
2、 标准液的稀释：用试剂二将标准液稀释至 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μmol/mL，稀释可参考下表。
序号 | 稀释前浓度（μmol/mL） | 标准液体积（μL） | 试剂二体积（μL） | 稀释后浓度（μmol/mL） |
1 | 5 | 40 | 960 | 0.2 |
2 | 0.2 | 500 | 500 | 0.1 |
3 | 0.1 | 500 | 500 | 0.05 |
4 | 0.05 | 500 | 500 | 0.025 |
5 | 0.025 | 500 | 500 | 0.0125 |
6 | 0.0125 | 500 | 500 | 0.00625 |
备注：实验中每个标准管需 200μL 标准溶液。
3、 样本测定：
试剂名称（μL） | 对照管 | 测定管 | 空白管 | 标准管 |
酶液 | 200 | 200 | - | - |
标准品 | - | - | - | 200 |
试剂一 | - |
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