滤纸酶（FPA）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 35 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 60 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
滤纸条 | 50 mg×50 条 | 常温保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1. 滤纸条：常温防潮保存。
2. 标准品：10mg 无水葡萄糖。临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解，配成 10 mg/mL 葡萄糖溶液备用，2-8℃保存两周。
产品说明：
纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖一类酶的总称，它不是单体酶，而是起协同作用的多组分酶系。以不溶性纤维素如滤纸为底物测定的纤维素酶称为滤纸酶，研究滤纸酶活力对纤维素酶总体酶活力的研究的有着重要意义。
FPA 水解滤纸产生还原糖，还原糖与 3,5 -二硝基水杨酸反应生成在 540 nm 有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定 540 nm 处吸光值变化可计算得 FPA 活性。
FPA
Filter Reducing Sugar
Reducing Sugar+3,5-Dinitrosalicylic Acid 3-Amino-5-Nitrosalicylate（540nm）
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1 mL 玻璃比色皿、超声破碎仪、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP 管（2 mL）。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 组织：按照质量（g）﹕蒸馏水体积(mL)为 1﹕5~10 的比例（建议称取约 0.1 g，加入 1 mL 蒸馏水）加入蒸馏水，冰浴匀浆后于 4℃，12000 rpm 离心 10 min，取上清置于冰上待测。
2. 细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管中，离心后弃上清；按照细胞或细菌数量（104 个）﹕蒸馏水体积（mL） 为 500~1000﹕1 的比例（建议 500 万细胞或细菌加入 1 mL 蒸馏水），冰浴超声波破碎细胞或细菌（功率 300 w， 超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3 min）；然后 4℃，12000 rpm 离心 10 min，取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体：直接检测。（若溶液有浑浊则离心后取上清进行测定）
二、测定步骤
1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 540 nm，蒸馏水调零。
2、将 10 mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 0.8、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2 mg/mL 的标准溶液备用。
3、标准品稀释表
序号 | 稀释前浓度（mg/mL） | 标准液体积（μL） | 蒸馏水体积（μL） | 稀释后浓度（mg/mL） |
1 | 10 | 200 | 1800 | 1 |
2 | 1 | 400 | 100 | 0.8 |
3 | 1 | 300 | 200 | 0.6 |
4 | 1 | 250 | 250 | 0.5 |
5 | 1 | 200 | 300 | 0.4 |
6 | 1 | 150 | 350 | 0.3 |
7 | 1 | 100 | 400 | 0.2 |
实验中每个标准管需200μL标准溶液。
4、 取 200 μL 样本沸水浴 10 min（盖紧，防止水分散失），放置常温后作为对照管。
5、操作表：(在 2 mL 离心管中操作，其中对照管与测定管用有滤纸的 EP 管，空白管与标准管无需滤纸)
试剂名称（μL） | 对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
煮沸样本 | 200 | - | - | - |
样本 | - | 200 | - | - |
每支EP 管中放入一个卷状滤纸条（注意要放入底部），作为底物。 | - | - |
标准溶液 | - | - | 200 | - |
蒸馏水 | - |
|
