总糖含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 50 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 50 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体 13 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1．标准品：10 mg 无水葡萄糖。临用前加 1 mL 蒸馏水溶解为 10 mg/mL 的葡萄糖标准品备用，2-8℃保存两周。
产品说明：
糖类物质是构成植物体的重要成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖，麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。
总糖酸水解为还原糖，还原糖在碱性条件下与DNS试剂共热后被还原成氨基化合物，在碱性溶液中呈红棕色，还原糖的量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系，以此测定样本中的总糖含量。
Reducing Sugar + DNS
Alkalinity Heating
3-Amino-5-Nitrosalicylic Acid (Reddish Brown)
技术指标：
最低检出限：0.0444 mg/mL
线性范围：0.1-1 mg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织样本的处理：称取约 0.1g 样本于 10mLEP 管中，加入 1mL 试剂一，1.5mL 蒸馏水，研磨匀浆，沸水浴 30min，加入 1mL 试剂二，涡旋混匀，用蒸馏水定容至 10mL，8000g，25℃离心 10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）。
2、血清（浆）、液体样本的处理：取 0.1mL 血清（浆）于 1mLEP 管中，加入 0.1mL 试剂一，0.15mL 蒸馏水， 匀浆，沸水浴 30min，加入 0.1mL 试剂二，涡旋混匀，用蒸馏水定容至 1mL，8000g，25℃离心 10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）。
二、测定步骤
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至 1、0.8、0.5、0.2、0.1mg/mL，标准液稀释可参考下表：
序号 | 稀释前浓度（mg/mL） | 标准液体积（μL） | 蒸馏水体积（μL） | 稀释后浓度（mg/mL） |
1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
2 | 1 | 160 | 40 | 0.8 |
3 | 1 | 100 | 100 | 0.5 |
4 | 1 | 40 | 160 | 0.2 |
5 | 1 | 20 | 180 | 0.1 |
备注：实验中每个标准管需 150μL 标准溶液。
3、加样表：
试剂（μL） | 空白管 | 测定管 | 标准管 |
蒸馏水 | 150 | - | - |
样本 | - | 150 | - |
标准品 | - | - | 150 |
试剂三 | 150 | 150 | 150 |
涡旋混匀，沸水浴10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温 |
蒸馏水 | 900 | 900 | 900 |
涡旋混匀，在 540nm 下测定吸光值，分别记为 A 空白管、A 测定管、A 标准管。计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管、ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。标准曲线和空白管只需测 1-2 次。
三、总糖含量计算
1、标准曲线的绘制：
根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。
2、按样本质量计算：总糖（mg/g 质量）=（x×V 样总）÷W× 稀释倍数=10×x÷W× 稀释倍数
3、按血清（浆）、液体
注意事项
1、此试剂盒对于纤维素的分解程度无法达到 100%。
2、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。
