土壤过氧化物酶(S-POD)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 粉剂×2 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 5 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体 10 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 液体 100 mL×1 瓶(自备) | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体 10 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前加入 10 mL 蒸馏水,用不完的试剂 2-8℃保存一周;
2、 试剂四:自备乙醚;
3、 标准品:相当于每 1mL 乙醚相中含有 0.2mg/mL 紫色没食子素。
产品说明:
S-POD主要来源于土壤微生物,能够氧化土壤有机物质产生过氧化物,在腐殖质的形成过程中具有重要作用。S-POD催化有机物质氧化成醌,后者在430nm有特征光吸收。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、0.5mol/L HCl溶液、1mL玻璃比色皿、30-50目筛、乙醚(不允许快递)、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30-50 目筛。
二、测定步骤
1、 标准品处理:将标准品用0.5mol/L HCl溶液稀释至0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0.01、0mg/mL,可参考下表。
序号 | 稀释前浓度(mg/mL) | 标准液体积(μL) | 0.5 mol/L HCl 体积(μL) | 稀释后浓度(mg/mL) |
1 | 0.2 | 500 | 500 | 0.1 |
2 | 0.2 | 400 | 600 | 0.08 |
3 | 0.2 | 300 | 700 | 0.06 |
4 | 0.2 | 200 | 800 | 0.04 |
5 | 0.2 | 100 | 900 | 0.02 |
6 | 0.2 | 50 | 950 | 0.01 |
7 | - | - | 1000 | 0 |
备注:试验中每个标准管需 1000μL 标准溶液。
2、 标曲测定:分光光度计预热30min以上,调节波长至430nm,0mg/mL管调零,直接测定稀释后各标准管的吸光度,记为A标准。
3、 样本测定: