注意:正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
规格:100T/96S
产品内容:
提取液:液体120mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存,临用前将试剂三倒入使其充分溶解备用。该试剂溶解后 10 天内有效。
试剂二:粉剂×2 支,4℃避光保存。临用前加 1mL 蒸馏水充分溶解。试剂三:液体22mL×1 瓶,4℃保存。
标准品:粉剂×1支,10mg半胱氨酸,4℃避光保存。临用前加入 1.157mL提取液,得到1000μg/mL氮标准液
产品说明:
氮素是构成生物体的一种必需元素。铵态氮进入植物细胞后形成氨基酸或酰胺,植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。
氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应,产生蓝紫色化合物,在570 nm 有特征吸收峰;通过测定
570 nm 吸光度,来计算氨基酸含量。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,室温匀浆后于25℃,12000g 离心10min,取上清待测。
二、测定步骤:
1、分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至570nm,分光光度计蒸馏水调零。
2、将1000μg/mL 氮标准液用提取液分别稀释为200、100、50、25、12.5 μg/mL
3、操作表:
试剂名称(μL) | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 15 | - | - |
标准品 | - | 15 | - |
蒸馏水 | - | - | 15 |
试剂一 | 150 | 150 | 150 |
无水乙醇 | 150 | 150 | 150 |
试剂二 | 15 | 15 | 15 |
充分混匀后盖紧瓶盖封口膜封口(防止水分散失),置于沸水浴中保温10min,冷却后反复颠
倒EP 管数次,将测定管8000rpm 离心5min 后取上清,吸取200μL 于微量玻璃比色皿或者96 孔板中,于570nm 测定吸光值。显色后务必在30min 内测完。计算△A=A 测定管-A 空白管,△A 标准=A 标准管-A 空白管。
三、植物氨态氮含量计算:
1、标准曲线的绘制
以各个氮标准液为横坐标,其对应的