糖原含量检测试剂盒说明书（微量法）
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 100 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 粉剂×1 支 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 粉剂×2 瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1. 试剂一：10 mg葡萄糖。临用前加1 mL蒸馏水充分溶解，2-8℃保存两周。
2. 工作液的配制：临用前取1瓶试剂二倒入3 mL蒸馏水，缓慢倒入12 mL浓硫酸，充分溶解混匀后使用。用不完的的试剂2-8℃保存一周。
糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖，是糖的主要的储存形式之一，主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量， 分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度，当血糖升高时可在肝脏合成糖原，血糖降低时，肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此，肝糖原对维持血糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时，肌糖原不能直接分解成血糖，必须先分解产生乳酸，随血液循环到肝脏，通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。
测定原理：蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原，在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。
Glycogen+ H2SO4+ Anthrone Furfural Derivatives（620nm）
技术指标：
最低检出限：0.002 mg/mL
线性范围：0.003125-0.25 mg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机，可调式移液器、微量比色皿/96孔板、浓硫酸（不允许快递）和蒸馏水。
一、 样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1﹑细胞或细菌：收集500~1000 万细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；加入0.75mL提取液超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；转移至10mL试管中，置于沸水浴中煮沸20min（盖紧，
防止水分散失），隔5min振摇试管1次，使充分混匀；取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5mL，混匀，8000g 25℃
离心10min，取上清液待测。
2﹑组织：称取0.1~0.2g样本，置于10mL试管中；加入0.75mL提取液，置于沸水浴中煮沸20min（盖紧，防止水分散失），隔5min振摇试管1次，使充分混匀；待组织全部溶解后，取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5mL，混匀，8000g 25℃离心10min，取上清液待测。
二、 测定步骤
1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm，分光光度计蒸馏水调零。
2. 试剂一稀释：取10μL 10mg/mL葡萄糖标准液，加入990μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.1 mg/mL葡萄糖溶液备用，现用现配。（实验中每管需要60μL，为减小实验误差，故配制大体积。）
3. 加样表（在 EP 管中反应）：
试剂（μL） | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
待测样本 | | | 60 |
试剂一 | | 60 | |
蒸馏水 | 60 | | |
试剂二 | 240 | 240 | 240 |
混匀，沸水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却，取200μL转移至微量比色皿或96孔板中，于620nm波长处，分别读取空白管、标准管和测定管吸光度，分别记为A1、A2 和A3。（空白管和标准管只要测1-2次）
三、 糖原含量的计算
1、 按照样本质量计算
糖原（mg/g 质量）= (C标准×V1)×(A3 -A1)÷(A2 -A1)÷(W×V1÷V2) ÷1.11= 0.450×(A3 -A1)÷（A2-A1)÷W
2、 按照样本蛋白浓度计算
糖原(mg/mg prot)= (C标准×V1)×(A3 -A1) ÷(A2 -A1) ÷(V1×Cpr) ÷1.11=0.09×(A3 -A1) ÷（A2-A1) ÷Cpr
3、按照细菌或细胞数量计算
糖原（mg/104 cell）= (C标准×V1)×(A3 -A1)÷(A2 -A1)÷( 细菌或细胞数量×V1÷V2) ÷1.11
= 0.450×(A3 -A1)÷（A2-A1)÷细菌或细胞数量
1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数，即111μg葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于100μg糖原用蒽酮所试剂显示的颜色；C标准：标准管浓度，0.1mg/mL；V1：加入反应体系中待测样本体积，0.06mL；V2：样本总体积，5mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；细菌或细胞数量：以104为单位，万个。
注意事项：
如果吸光值大于1.4，建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。
