生物碱含量试剂盒说明书(微量法)
100管/96样
正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
生物碱存在于自然界（主要为植物，但有的也存在于动物）中的一类含氮的碱性有机化合物，大多数有复杂的环状结构，氮素多包含在环内，有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。
测定原理：
生物碱与溴甲酚绿指示剂反应，生成绿色化合物，在416nm处有最大吸收峰。需自备的仪器和用品：
酶标仪、水浴锅、超声波清洗器、可调式移液器、96孔板、研钵、80%乙醇、氯仿和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体12mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体30mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体15mL×1瓶，4℃避光保存；
生物碱的提取：
样本烘干粉碎，过80目筛。称取约0.1g样本，加入0.1mL试剂一，再加入0.9mL80%乙醇，充分混匀后转移到EP管中，超声波提取60min，8000g，25℃离心10min，取上清液待测。
另取空EP管，加入0.1mL试剂一和0.9mL80%乙醇，混匀后作为空白液。测定步骤：
1、酶标仪预热30min以上，调节波长至416nm处。
2、操作表：在EP管中加入如下试剂
试剂名称（μL） | 空白管 | 测定管 |
样本 | | 50 |
空白液 | 50 | |
试剂二 | 250 | 250 |
试剂三 | 100 | 100 |
混匀，室温静置5min
剧烈振荡混匀，室温静置40min，吸取下层氯仿层200μL于96孔板，416nm处读取吸光值A，ΔA=A测定-A空白，空白管只要做一管。
生物碱含量计算：
标准条件下测定的回归方程为y=1.915x-0.0005，R2=0.9942；x为标准品浓度（mg/mL），
y为ΔA。
生物碱含量(mg/g干重)=(ΔA+0.0005)÷1.915×V样总÷W=0.522×(ΔA+0.0005)÷WV样总：加入提取液体积，1mL；W：样本干重，g。
