山梨醇含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 15 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 15 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 粉剂 10 mg×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、标准品：临用前将标准品用 1mL 蒸馏水溶解，配制成浓度为 10 mg/mL 的标准液待用，2-8℃可保存 2 周。
产品说明：
山梨醇广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是糖运输形式之一，而且与生物抗逆性和食物风味密切相关。因此，在糖代谢、抗逆性和食品研究中经常需要检测山梨醇含量变化。
山梨醇在碱性溶液中与铜离子形成蓝色络合物，在 655nm 波长有特征吸收峰。
Sorbitol + Cu2+ Blue Complex（655nm）
Alkalinity
技术指标：
最低检出限：0.0261 mg/mL
线性范围：0.0625-4 mg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约 0.2g 样本，加入 2mL 蒸馏水，研磨成匀浆，置沸水浴中煮沸 10 分钟（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，8000g，常温离心 10min，取上清液待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 655nm，蒸馏水调零。
2、标准溶液的制备：临用前将 10mg/mL 标准液用蒸馏水稀释至 4、2、1、0.5、0.25、0.125、0（空白管）mg/mL
标准溶液待测。
3、标准液稀释可参考下表。
序号 | 稀释前浓度（mg/mL） | 标准液体积（μL） | 蒸馏水体积（μL） | 稀释后浓度（mg/mL） |
1 | 10 | 800 | 1200 | 4 |
2 | 4 | 1000 | 1000 | 2 |
3 | 2 | 1000 | 1000 | 1 |
4 | 1 | 1000 | 1000 | 0.5 |
5 | 0.5 | 1000 | 1000 | 0.25 |
6 | 0.25 | 1000 | 1000 | 0.125 |
7 | 0 | 0 | 1000 | 0（空白管） |
备注：实验中每个标准管需 1000μL 标准溶液。
4、 样本测定（在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）：
试剂（μL） | 标准管 | 测定管 |
试剂一 | 150 | 150 |
试剂二 | 140 | 140 |
样本 | - | 1000 |
标准液 | 1000 | - |
涡旋混匀，室温静置 15min，8000g，常温离心 10min，取 1mL 上清液测 655nm 下吸光值A，分别记为A 标准、A 测定、A 空白。ΔA 测定=A 测定-A 空白，ΔA标准=A 标准-A 空白。标准曲线和空白管只需测 1-2 次。 |
三、山梨醇含量计算
1、根据标准管的浓度（y，mg/mL）和吸光度 A（x，ΔA 标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将 A 测定（x，
ΔA 测定）带入公式计算样本浓度（y，mg/mL）。
2、按照样本质量计算
山梨醇含量（mg/g 质量）=y×V1÷(W×V1÷V2)=2×y÷W 3、按照样本蛋白浓度计算
山梨醇含量（mg/mg prot）=y×V1÷(V1×Cpr)=y÷Cpr
V1：加入样本体积，1mL；V2：加入蒸馏水体积，2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
注意事项
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。计算公式中注意乘以稀释倍数。
