土壤多酚氧化酶（S-PPO）活性检测试剂盒说明书
微量法
产品组成:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 粉剂×2 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 5 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体 50 mL×1 瓶（自备） | 2-8℃保存 |
标准液 | 液体 10 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂一：临用前取 1 瓶加入 7 mL 蒸馏水，用不完的试剂 2-8℃保存 2 周；
2、 试剂三：自备乙醚；
3、 标准液：重铬酸钾溶液（5 mmol/L），相当于 0.2 mg/mL 紫色没食子素溶液。
产品说明：
S-PPO 主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放，催化土壤中芳香族化合物氧化成醌， 醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成有机质和色素，完成土壤芳香族化合物循环，用于土壤环境修复。
S-PPO 能够催化邻苯三酚产生紫色没食子素，后者在 430nm 有特征光吸收。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板（非聚苯乙烯材质）、乙醚（不允许快递）、30~50 目iyg
一、 样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30~50 目筛。
二、测定步骤
1、可见分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 430nm，可见分光光度计试剂三调零。
2、标准液稀释：用 0.5mol/L HCL 溶液将标准液稀释至 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0 mg/mL。
3、标准液稀释表：
序号 | 稀释前浓度（mg/mL） | 标准液体积（μL） | 0.5mol/L HCl 体积（μL ） | 稀释后浓度（mg/mL） |
1 | 0.2 | 1000 | 0 | 0.2 |
2 | 0.2 | 500 | 500 | 0.1 |
3 | 0.1 | 500 | 500 | 0.05 |
4 | 0.05 | 500 | 500 | 0.025 |
5 | 0.025 | 500 | 500 | 0.0125 |
6 | 0.0125 | 500 | 500 | 0.00625 |
7 | 0.00625 | 500 | 500 | 0.003125 |
8 | 0.003125 | 0 | 500 | 0 |
备注：实验中每个标准管需 200μL 标准溶液。
4、标准曲线的建立：以 0 mg/mL 的标准液调零，取 200μL 稀释好的标准液于微量玻璃比色皿/96 孔板中在 430nm处测定吸光值A，根据吸光度（x）和浓度（y，mg/mL）做出标准曲线。
5、样本测定表（1.5mLEP 管）
