多聚半乳糖醛酸酶（PG）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 液体 8 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 20 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂一：若溶液中有晶体析出，37℃水浴溶解；
2、试剂二：临用前加入 8 mL 蒸馏水，60℃水浴助溶；
3、标准品：10mg 半乳糖醛酸。临用前加入 0.943 mL 蒸馏水，配成 50 μmol/mL 的标准液。
产品说明：
多聚半乳糖醛酸酶（Ploygalacturonase，PG）属果胶酶的一种，广泛存在于植物、细菌及真菌中。其催化多聚半乳糖醛酸分解，在果实软化、花粉授粉、种子发育成熟及器官脱落等方面具有重要作用，并且病原菌在侵染宿主植物时，可分泌多聚半乳糖醛酸酶来降解宿主细胞壁，进而导致病程发展。
PG 水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与 DNS 试剂反应生成在 540 nm 有特征吸收峰的棕红色物质，测定 540 nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1 mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1 : 5~10 的比例（建议称取约 0.1 g，加入 1 mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，16000 g，离心 10 min，取上清置于冰上待测。
细菌：先收集细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细菌数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000︰1 的比例（建议 500 万个细菌加入 1 mL 提取液），冰浴超声波破碎细菌（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s， 总时间 5 min）；然后 4℃，16000 g，离心 10 min 取上清置于冰上待测。
液体：直接检测或用提取液稀释后检测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 540 nm，蒸馏水调零。
2、将 50 μmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为 10、6、4、3、2、1.5、1.2 μmol/mL 的标准溶液备用。
3、操作表：(在 1.5mL 离心管中)
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 空白管 | 标准管 |
样本 | 50 | 50 | - | - |
蒸馏水 | - | - | 50 | - |
标准溶液 | - | - | | 50 |
试剂一 | 100 | 100 | 100 | 100 |
试剂二 | 100 | - | 100 | 100 |
40℃ 水浴准确反应 2 h 后，沸水浴加热 10 min（盖紧，防止水分散失）， 取出后冷却至室温。 | - |
试剂二 | - | 100 | - | - |
试剂三 | 250 | 250 | 250 | 250 |
沸水浴加热 5 min（盖紧，防止水分散失），取出后冷却至室温。 |
蒸馏水 | 500 | 500 | 500 | 500 |
测定 540 nm 处的吸光度，记为 A 测定管、
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