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商品参数

商品描述

蔗糖合成酶（分解方向；SS-I）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

产品组成：

溶液的配制：

1、试剂二：临用前加入 2.5 mL 试剂一充分溶解待用，用不完的试剂建议分装后，-20℃保存，避免反复冻融；2、标准品：20 mg 果糖，临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解，配成 20 mg/mL 果糖溶液备用，4℃保存一周。

产品说明：

蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代谢过程的关键酶，负责催化蔗糖分解与合成的可逆反应，其分解活性可以催化蔗糖水解成 UDPG 与果糖，参与淀粉、纤维素和半纤维素的合成等代谢途径。

分解方向 SS-I 催化蔗糖和 UDP 生成果糖与 UDPG，果糖与 3,5 -二硝基水杨酸反应生成在 540nm 有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定 540nm 处吸光值变化可计算得 SS-I 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP 管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，8000g，离心 10min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、将 20mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 5、4、3、2、1mg/mL 的标准溶液备用。

3、操作表 (在 1.5mL 离心管中操作) ：

蒸馏水	-	-	-	20
试剂一	80		80	80
试剂二	-	80	-	-
混匀，30℃水浴 30 min 后，95℃水浴 10 min（盖紧，防止水分散失）。
试剂三	100	100	100	100
混匀，沸水浴 5 min（盖紧，防止水分散失），冷却至室温。
蒸馏水	800	800	800	800
混匀，置于 1mL 玻璃比色皿中，测定 540nm 处吸光值 A，分别记为 A 对照管，A 测定管，A 标准管，A 空白管。计算 ΔA=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管（标准曲线只需检测 1-2 次）。