土壤总磷/有机磷/无机磷含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 50 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 11 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 粉剂×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂一：临用前用蒸馏水稀释 10 倍后再用；
2、试剂三：临用前配制，加入 20 mL 蒸馏水，充分溶解后加入 10 mL 试剂二，混匀；配好的溶液应为浅黄色。若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，该试剂应现配现用。
3、标准品：40 μg/mL 无机磷标准品。
产品说明：
土壤总磷包括有机磷和无机磷，其中无机磷能够直接被植物利用。土壤有机磷经过矿化分解而转化为无机磷。同时测定土壤总磷、有机磷和无机磷，可以全面反映土壤磷营养状况。
利用钼蓝法定磷。取一份土样，通过浸提法测定土壤无机磷含量；另外取一份土样，经高温灼烧后，土壤有机磷转化为无机磷，测得土壤总磷含量；总磷含量减去无机磷含量，即可计算出有机磷含量。
技术指标：
最低检出限：0.5249 μg/mL
线性范围：2-80 μg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式水浴锅，分析天平、可调式移液器、550℃高温电炉、1mL玻璃比色皿、研钵、蒸馏水、30-50目筛子、100目筛子。
操作步骤：
一、样本处理：（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、无机磷：称取通过 30-50 目筛子的风干土样 0.1g，转移到 10mL 离心管，加入 10mL 试剂一，震荡混匀，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm，25℃离心 10min，取上清液一，用于无机磷含量测定。
2、总磷提取：取通过 100 目筛子的风干土样，550℃灼烧 1h，冷却后称取约 0.1g，转移到 10mL 离心管，加入10mL 试剂一，震荡混匀，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm，25℃，离心 10min，取上清液二，用于总磷含量测定。
二、测定步骤
1、分光光度计预热 30min，调节波长到 660nm，蒸馏水调零。
2、打开水浴锅，调节温度到40℃。
3、空白管：取EP管，依次加入500μL蒸馏水，500μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10min后于 660nm测定吸光度，记为A空白管。 空白管只需做1-2次。
4、标准管：取EP管，依次加入50μL标准液，450μL蒸馏水，500μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10min 后于660nm测定吸光度，记为 A标准管。 标准管只需做1-2次。
5、测定管：取EP管，依次加入50μL上清液一或者上清液二，450μL蒸馏水，500μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10min后于660nm测定吸光度，记为A测定管。
三、土壤磷含量计算
土壤无机磷含量（μg/g 土样）=[C 标准液×(A测定管-A 空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V总÷W
=400×(A测定管-A空白管)÷(A 标准管-A空白管)÷W C 标准液：40μg/mL；W：土壤样本质量，g；V总： 上清液一总体积，10mL。
土壤总磷含量（μg/g 土样）=[C 标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V总÷W
=400×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W C 标准液：40μg/mL；W：土壤样本质量，g；V总：上清液二总体积，10mL。土壤有机磷（μg/g 土样）=土壤总磷-土壤无机磷
注意事项：
1、试剂三配制过程中，可能会产生黑色固体，其不影响结果，注意吸取时不要将黑色固体吸入。
2、如果吸光值大于1时，样本需用蒸馏水做相应稀释。
3、空白管和标准管只需测定1-2次。
4、需在40min内完成比色。
