葡萄糖脱氢酶（GCDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法
产品组成：

溶液的配制：
1、 试剂二：临用前加入 15 mL 试剂一溶解，用不完的试剂 2-8℃保存 8 周；
2、 试剂三：临用前每瓶加入 5 mL 试剂一溶解，用不完的试剂建议分装后-20℃避光可保存 4 周；
3、 工作液的配制：按照试剂一︰试剂二︰试剂三为 4︰3︰2 的体积比例充分混匀，现用现配，用前 37℃预热 10 min。
产品说明：

GCDH（EC 1.1.1.47）催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H，主要存在于多种微生物和高等动物的肝脏中。GCDH是一种制备高含量低聚果糖的理想用酶，同时也是临床血糖测定的诊断用酶，可广泛用于食品工业及医药工业领域中。
GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH，利用NADH在340nm处吸光值的变化即可反映葡萄糖脱氢酶的活性。
GCDH
Glucose + NAD Gluconate + NADH（340nm）
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1 mL 石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
组织：按照组织质量（g）︰提取液体积(mL)为1︰5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃，离心10 min，取上清置于冰上待测。
细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（104个）︰提取液体积（mL） 为500~1000︰1的比例（建议500万个细胞或细菌加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞或细菌（功率20%或200 W，超声3s，间隔7s，总时间5min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
血浆（清）：直接检测。

二、测定步骤
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、操作表（在 1 mL 石英比色皿中分别加入下列试剂）：

三、GCDH酶活计算
1、按样本蛋白浓度计算
酶活定义：每毫克蛋白每分钟产生 1nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
GCDH 酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×10 9×V 反总÷（V 样×Cpr ）÷T=1607.7×ΔA÷Cpr 2、按样本质量计算
酶活定义：每克样本每分钟产生 1nmol 的NADH 定义为一个酶活力单位。
GCDH 酶活（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×10 9×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T =1607.7×ΔA÷W 3、按细菌和细胞数量计算
酶活定义：每 104 个细胞每分钟产生 1nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
GCDH 酶活（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×10 9×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量（万个））÷T
=1607.7×ΔA÷细胞数量（万个）
4、按液体体积计算
酶活定义：每 mL 样本每分钟产生 1nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
GCDH 酶活（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×10 9×V 反总÷V 样÷T=1607.7×ΔA
ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10 3 L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；109：单位换算系数，1mol=109nmol； V 反总：反应体系总体积，1×10 -3L；V 样：反应体系中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr： 样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，1min。
注意事项：

1、样本提取上清液置于冰上待测，且样本提取完成后建议当天提取当天内测完。
2、当 A1 或 A2 大于 1 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。
3、当 ΔA 大于 1 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。