产品组成:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 30 mL×1 瓶(自备) | 常温保存 |
试剂二 | 液体 30 mL×1 瓶(自备) | 常温保存 |
试剂三 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 液体 7 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂五 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂六 | 液体 20 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 液体 20 mg×1 支 | -20℃保存 |
溶液的配制:
1、试剂一:自备无水乙醇,常温保存。
2、试剂二:自备正庚烷,常温保存。
3、试剂五贮备液的制备:将试剂五的粉剂溶于 2 mL 无水乙醇配制成贮备液,4℃避光保存待用。
4、试剂五应用液的制备:取试剂五贮备液用无水乙醇 20 倍稀释后使用,建议当天配制当天使用。
5、标准品:临用前加入 1 mL 试剂三,配成 20 mg/mL 的标准品溶液。
产品说明:
维生素E(Vitamin E)是一种天然脂溶性抗氧化剂,能阻断机体不饱和脂肪酸的过氧化,维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能,并可清除超氧阴离子自由基,具有延缓衰老、预防溶血性贫血等作用,在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。
VE还原Fe3+为Fe2+,Fe2+与1,10-菲罗啉产生有色络合物,在510 nm有特征吸收峰。
技术指标:
最低检出限:3.0152 μg/mL
线性范围:3.125-50 μg/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、天平、台式离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、漩涡震荡仪、无水乙醇、正庚烷、蒸馏水和EP管。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织样本
试剂名称 | |
组织 (g) | 0.1 |
蒸馏水 (μL) | 200 |
试剂一 (μL) | 300 |
试剂二 (μL) | 500 |
匀浆后在漩涡混匀仪上震荡 5min(充分抽提),于 25℃,5000g离心 5min,取上层正庚烷抽提液 300μL 加入到 900μL 无水乙醇中(上层抽提液:无水乙醇=1:3)混匀待测。 |
注意:吸取上层正庚烷抽提液时,切勿将中间无水乙醇与水的液相层吸入。
2、血清(血浆)样本
试剂名称 | |
血清(血浆)(μL) | 200 |
蒸馏水 (μL) | 200 |
试剂一 (μL) | 300 |
试剂二 (μL) | 500 |
匀浆后在漩涡混匀仪上震荡 5min(充分抽提),于 25℃,5000g离心 5min,取上层正庚烷抽提液 300μL 加入到 900μL 无水乙醇中(上层抽提液:无水乙醇=1:3)混匀待测。 |
注意:离心后,吸取上层正庚烷抽提液时,切勿将中间无水乙醇与水的液相层吸入。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至510nm,无水乙醇调零。
2、标准溶液的制备:将20mg/mL标准液用试剂三稀释为50、25、12.5、6.25、3.125 μg/mL的标准溶液备用。
3、操作表:(在1.5 mL离心管中依次加入下列试剂)
试剂名称 | 对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
待测样本 (μL) | 500 | 500 | - | - |
标准溶液 (μL) | - | - | 500 | - |
试剂三 (μL) | - | - | - | 500 |
试剂四 (μL) | 100 | 100 | 100 | 100 |
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