半胱氨酸（Cys）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 25 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 液体 45 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×2 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂二：用前一天，向试剂二中加 5 mL 蒸馏水充分溶解，再加磷酸 1.25 mL，混匀后盖紧（防止水分散失）沸水浴 2h；冷却后加 20 mL 蒸馏水，4℃可保存 2 周。（一瓶即可做 50T，为延长试剂盒使用时间，故多给一瓶）
2、标准品：10 mg 半胱氨酸。将标准品加入 4.13mL 蒸馏水得到 20μmol/mL 的标准液。4℃可以保存 4 周。
产品说明：
蛋白质含有三种含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和半胱氨酸（Cys）。其中，Cys 是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸，从甲硫氨酸转化而来，并且可与胱氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形成，经常是蛋白质活性中心的组成部分，还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外，Cys 大量积聚在皮肤和粘膜表面，在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性，并且补充巯基，以维持皮肤的正常代谢，调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
Cys 还原磷钨酸生成钨蓝，在 600nm 处有吸收峰；通过测定 600nm 吸光度，计算 Cys 含量。
技术指标：
最低检出限：0.0053 μmol/mL
线性范围：0.03125-3 μmol/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、磷酸和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、液体样本中半胱氨酸提取：
取 0.2mL 液体样本，加提取液 0.3mL，充分混匀，11000rpm 4℃离心 10min，取上清液待测。
2、组织中半胱氨酸提取：
称取约 0.2g 组织，加入 0.5mL 提取液，冰上充分研磨，11000rpm 4℃离心 10min，取上清液待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 600nm，蒸馏水调零。
2、标准液的配制：用蒸馏水将 20μmol/mL 的标准液稀释为 2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625 μmol/mL 浓度的标准溶液。
3、按下表加入各试剂
试剂名称（μL） | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 200 | | |
标准品 | | 200 | |
蒸馏水 | | | 200 |
试剂一 | 500 | 500 | 500 |
试剂二 | 300 | 300 | 300 |
混匀后室温静置 15min，于 600nm 处测定吸光值。
三、半胱氨酸含量计算
1、 标准曲线的绘制：
以各标准溶液浓度为 x 轴，以?A（A 标准管-A 空白管）为 y 轴做标准曲线，得到方程 y=kx+b。将（A 测定管-A 空白管）带入方程求 x 值。
2、 半胱氨酸含量计算：
- 按液体样本的体积计算
半胱氨酸含量（μmol/mL）=x×V 样总÷V=2.5x
- 按样本质量计算
半胱氨酸含量（μmol/g 质量）=x×V 样总÷W=0.5x÷W V：液体样本体积，0.2mL；V 样总：提取体系体积，0.5mL；W：样本质量，g。
注意事项：
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
