蔗糖磷酸化酶（SP）活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
产品内容：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 60 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 液体 20 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 2mL×1 支 | 4℃保存 |
试剂四 | 粉剂×2 瓶 | -20℃保存 |
试剂五 | 粉剂×1 瓶 | -20℃保存 |
试剂六 | 粉剂×3 支 | -20℃保存 |
试剂七 | 粉剂×4 支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂二：临用前加入 15 mL 蒸馏水，充分混匀。4℃可以保存 4 周；
2、试剂四：临用前取 1 瓶加入 1.5 mL 蒸馏水，充分混匀。分装后-20℃保存，避免反复冻融，可以保存 2 周；3、试剂五：粉剂置于瓶内玻璃管中。临用前加入 10 mL 蒸馏水，充分混匀。-20℃分装保存，避免反复冻融， 可以保存 4 周；
4、试剂六：临用前取 1 支加入 1 mL 蒸馏水，充分混匀；可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃可以保存 2 周；临用前按试剂六：蒸馏水=1:1 的比例稀释试剂六，现用现配；
5、试剂七：临用前取 1 支加入 0.7 mL 蒸馏水，充分混匀；可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃可以保存 2 周；临用前按试剂七：蒸馏水=1:1 的比例稀释试剂七，现用现配。
产品说明：
蔗糖磷酸化酶（Sucrose Phosphorylase, SP）(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中，属于糖基水解酶 13 家族， 是一种催化转移葡萄糖苷键的酶，能够催化蔗糖和无机磷酸盐合成 1-磷酸-葡萄糖。该酶主要以蔗糖、1-磷酸葡萄糖为供体，多类物质如多羟基的糖和糖醇、酚羟基、羧基等为受体，催化合成各种糖苷。 SP 能够催化蔗糖产生 1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为 6-磷酸葡萄糖，在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原 NADP+生成 NADPH，导致 340nm 光吸收值增加。通过 340nm 吸光度的增加速率来反映 SP 活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、研钵/匀浆器、1mL 石英比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照组织质量(g)︰提取液体积(mL)为 1︰5-10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1 mL 提取液） 进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 10min ，取上清置于冰上待测。
2、细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管内，3000rpm 离心 5min 后弃上清；按照细胞或细菌数量（104 个）： 提取液体积（mL）为 500-1000︰1 的比例（建议 500 万个细胞或细菌加入 1 mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞或细菌（功率 200 W，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min ，取上清置于冰上待测。
3、液体：直接检测。若液体浑浊可离心后取上清测定。
二、测定步骤
1、紫外分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 340 nm，蒸馏水调零。
2、试剂一 37℃预热 10min。
3、操作表：
试剂名称（μL） | 测定管 | 空白管 |
试剂一 | 325 | 425 |
试剂二 | 250 | 250 |
试剂三 | 25 | 25 |
试剂四 | 50 | 50 |
试剂五 | 50 | 50 |
试剂六 | 100 | 100 |
试剂七 | 100 | 100 |
混匀，37℃水浴预热 5min |
样本 | 100 | - |
将上述试剂分别加入比色皿后迅速吹打混匀，记录第 15s 的吸光值 A1 测定（A1 空白），迅速置于 37℃水浴或培养箱 2min，拿出迅速擦干测定 2min15s 时的吸光值 A2 测定（A2 空白），计算 ΔA =（A2 测定-A1 测定）-
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