可溶性淀粉合成酶（SSS）活性检测试剂盒说明书

紫外分光光度法

产品组成：

25T溶液的配制：

1、试剂二：临用前取 1 瓶试剂二A 加入 8mL 试剂一，缓慢加热，逐渐升温使其溶解，冷却后加入试剂二 B和试剂二C 混合溶解，这样可以分两批配制并且测定，用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融。
2、试剂三：临用前试剂三 B 加入试剂三 A 溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融。
3、试剂四：临用前先离心，取 7 μL 试剂四加入 2.24 mL 溶解好的试剂三混合备用（约 14T），现用现配，也可根据样本量按比例配制。
4、试剂五：临用前取试剂五 B 和试剂五 C 加入试剂五 A 溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融。
5、试剂六：临用前取 1 支加入 208 μL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融。
6、试剂七：临用前加入 2mL 蒸馏水，用不完的试剂-20℃分装保存 8 周，避免反复冻融。
50T 溶液的配制：
1、试剂二：临用前取 1 瓶试剂二A 加入 8 mL 试剂一，缓慢加热，逐渐升温使其溶解，冷却后加入 1 支试剂二 B 和 1 支试剂二 C 混合溶解，这样可以分两批配制并且测定，用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融。
2、试剂三：临用前取 1 瓶试剂三 B 加入 5mL 试剂三 A 溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融。
3、试剂四：临用前先离心，取 13 μL 试剂四加入 4.16 mL 溶解好的试剂三混合备用（约 27T），现用现配，也可根据样本量按比例配制。
4、试剂五：临用前取 1 瓶试剂五 B 加入 8mL 试剂五 A 和 1 支试剂五 C 溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融。
5、试剂六：临用前取 1 支加入 208 μL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融。
6、试剂七：临用前加入 2mL 蒸馏水，用不完的试剂-20℃分装保存 8 周，避免反复冻融。

产品说明：
SSS（EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。
SSS 催化ADPG 与淀粉引物（葡聚糖）反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成 ADP，在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 NADP+还原为 NADPH，NADPH 生成量与前一步反应中ADP 生成量呈正比，340nm 下测定 NADPH 增加量即可计算 SSS 活性。
SSS

ADP-Glucose + Starch Primer ADP + Starch
PK
PEP +ATP Pyruvic Acid + ATP
HK

D-Glucose + ATP G-6-P + ADP
G6PDH

G-6-P + NADP Gluconate + NADPH (340nm)
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
粗酶液制备：称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1. 紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定：在EP管内按顺序加入