葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 40 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 液体 12 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×2 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂五 | 液体 8 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂三：临用前用 8 mL 蒸馏水溶解备用。
2、试剂四：临用前用 8 mL 蒸馏水溶解备用。
3、标准品：10 μmol/mL 磷标准液。临用前用蒸馏水稀释 16 倍至 0.625 μmol/mL 的标准溶液备用。
4、工作液的配制：试剂二中加入 5 mL 试剂一充分溶解备用。可以将工作液分装后-20℃保存，禁止反复冻融。5、定磷试剂的配制：按 H2O:试剂三:试剂四:试剂五（V:V:V:V）=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
产品说明：
葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）是一种水解磷酸化合物的磷酸酶，广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和无机磷，利用钼蓝法测定无机磷含量的增加，即可反映G6P活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样本：直接检测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
2、操作表：在1.5ml EP管中进行下列操作：
| 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
样本（μL） | 40 | 40 | | |
工作液（μL） | 160 | |
充分混匀，37℃（哺乳动物）或者25℃（其他物种）水浴反应10min。反应后迅速放入沸水中沸水浴10min。取出冷却至常温 |
工作液（μL） | - | 160 |
10000rpm常温离心10min后取上清。 |
上清液（μL） | 100 | 100 | - | - |
标准溶液（μL） | - | - | 100 | - |
定磷试剂（μL） | 500 | 500 | 500 | 500 |
蒸馏水（μL） | 400 | 400 | 400 | 500 |
充分混匀，40℃反应 10min 测定 660nm 处吸光值，测定管、对照管、空白管、标准管测定的吸光度分别记为 A
|
