土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 3mL×1 瓶（自备） | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 30mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 粉剂×2 瓶 | -20℃保存 |
试剂四 | 液体 60mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体 1mL×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂一：甲苯自备；
2、试剂三：临用前取 1 瓶加入 10mL 蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存一周，避免反复冻融；
3、标准品：5mmol/L 的对硝基苯酚溶液。临用前用试剂二将标准品稀释 50 倍得 100μmol/L 的标准溶液。（具体稀释过程见操作步骤）
产品说明：
土壤芳基硫酸酯酶来自于土壤微生物，能酶促土壤有机硫化物转化为植物可吸收的无机态硫，在硫素的生物 化学循环和植物的硫营养代谢中具有重要的作用，是反映土壤质量的一个重要生物学指标。
S-ASF能够催化对-硝基苯硫酸钾生成对-硝基苯酚，后者在410nm有特征光吸收
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、恒温水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、研钵、冰、30-50 目筛、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30-50 目筛。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min，波长调至410nm，蒸馏水调零。
2、标准溶液的稀释：取20μL 5mmol/L的对硝基苯酚溶液，加入980μL试剂二，充分混匀，配制成100μmol/L标准液待测，现用现配。（实验中每管需要500μL，为减小实验误差，故配制大体积。）
3、加样表：
试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
风干土样（g） | 0.1 | 0.1 | - | - |
试剂一 | 50 | 50 | - | - |
充分振荡混匀，使土样全部潮湿，室温放置15min | - | - |
试剂二 | 500 | 500 | - | - |
试剂三 | 400 | - | - | - |
充分混匀，置于37℃水浴锅或37℃恒温培养箱反应1h后，立即沸水浴5min（盖紧，缠封口膜，防止水分散失），流水/冰浴 冷却。 | - | - |
试剂三 | - | 400 | - | - |
10000rpm，25℃离心10min，取上清液待测 | - | - |
上清液 | 500 | 500 | - | - |
标准品 | - | - | 500 | - |
蒸馏水 | - | -
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