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商品参数

商品描述

中性蛋白酶（NP）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

产品组成：

溶液的配制：

1、试剂一：临用前加入 10mL 蒸馏水，充分溶解。

2、试剂二：临用前加入 10mL 提取液，沸水浴中搅拌溶解。

3、标准品：20μmol/mL 标准酪氨酸。

产品说明：

NP 在一定的温度和中性 pH 条件下，催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点，中性蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。中性条件下，NP 催化酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在 680nm 有特征吸收峰。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

研钵/匀浆器、台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP 管、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称约0.1g组织，加入1mL提取液，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待测。或直接称取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待测。

二、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

2、试剂一、试剂二和试剂三置于30℃水浴保温30min以上。

3、标准溶液的配制：临用前将20μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25μmol/mL标准溶液使用，现用现配。

4、样本测定（1.5mLEP管中分别加入下列试剂）：

试剂名称（μL）	对照管	测定管	空白管	标准管
粗酶液	100	100
试剂一	200
试剂二		200
混匀后30℃水浴保温10min
试剂一		200
试剂二	200
混匀后10000rpm 4℃离心10min，取上清
上清	200	200
蒸馏水			200
标准品				200
试剂三	1000	1000	1000	1000
试剂四	200	200	200	200
混匀后30℃水浴保温20min，取1mL于1mL玻璃比色皿中，于680nm测定光吸收，分别记为A对照管、A 测定管、A空白管、A标准管。并计算ΔA测定=A测定管-A对照管、ΔA标准=A标准管-A空白管。