土壤硝态氮含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 粉剂×2 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 100 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂一：临用前取 1 瓶加入 2 mL 浓硫酸充分溶解。配制好后尽快使用，2-8℃可保存一周。
2、标准品：10 mg 硝酸钾。临用前加入 1.386 mL 蒸馏水溶解，配成 1000 μg/mL 的 NO --N 标准液，2-8℃保存两周。
产品说明：
硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素，土壤中硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接关系到作物的产量与品质。
在浓酸条件下，NO -与水杨酸反应生成硝基水杨酸，在碱性条件下（pH>12）呈黄色，其颜色深浅与含量成正比，即可计算得硝态氮含量。
技术指标：
最低检出限：0.0495 μg/mL
线性范围：0.1953125-80 μg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、振荡器、浓硫酸、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
按照土壤质量（g）：蒸馏水体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 土样，加入 1mL 蒸馏水）加入蒸馏水，置于震荡仪中振荡提取 1h，10000g，25℃离心 10min，取上清待测。（土样要求参考注意事项 1.2.3.）。
二、测定步骤
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 410nm，蒸馏水调零。
2、标准溶液的稀释：取 25μL 1000μg/mL NO3--N 标准液，加入 975μL 蒸馏水，充分混匀，配制成 25μg/mL 标准液使用，现用现配。（实验中每管需要 40μL，为减小实验误差，故配制大体积）。
3、操作表：
试剂名称（μL） | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 40 | | |
标准溶液 | | 40 | |
蒸馏水 | | | 40 |
试剂一 | 60 | 60 | 60 |
充分混匀，置于 25℃水浴锅反应 30min |
试剂二 | 1400 | 1400 | 1400 |
涡旋振荡，使出现的沉淀充分溶解，取 1mL 反应液于 1mL 玻璃比色皿中测定 410nm 处吸光值 A，记为A 测定管，A 标准管，A 空白管。计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。标准管 与空白管只需测 1-2 次。 |
三、NO --N 含量的计算
注意事项：NO --N 含量（μg/g 土样）=ΔA 测定÷ΔA 标准×C 标准×V 提取÷W=25×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W W：样本质量，g；C 标准：标准溶液浓度，25μg/mL；V 提取：提取液体积，1mL。
注意事项：
1、土壤胶体不吸附硝酸根离子，且其易溶于水，在土壤内部移动，所以测定多个样本或者重复样本室注意保持相同的采样深度。
2、土壤经风干或者烘干很容易引起硝态氮含量的变化，所以建议采用新鲜土壤进行测定。样品采集后应于 4℃ 下密封运输和保存，并在 3d 内分析完毕。否则，应于-20℃（深度冷冻）下以小块、小份保存，样品中硝酸盐氮可以保存数周。当测定深度冷冻的硝酸盐氮含量时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h 内完成样品解冻、匀质化和提取；如果在 4℃下解冻，解冻时间不应超过 48 h。
3、如果要比较不同样本间的硝态氮含量，需将土样烘干后按干重计算后再进行比较。
4、试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。
5、如果吸光值大于 1.5，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。
