产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 自备 | 4℃保存 |
试剂四 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂五 | 液体 1.5mL×1 支 | 4℃保存 |
试剂六 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
溶液配制：
1、试剂三：自备，石油醚，约需要 30mL。
2、试剂四：该试剂具有强挥发性和一定的毒性，注意在通风橱操作并且每次用完用封口膜密封保存。
3、试剂五：试剂有腐蚀性，注意防护。
产品说明：
木质素是构成植物细胞壁的成分之一，具有使细胞相连的作用。木质素存在于木质组织中，主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁，为次生壁主要成分。
木质素中的酚羟基发生乙酰化后在280nm处有特征吸收峰，280nm的吸光值高低与木质素含量正相关。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵、EP管、封口膜、冰乙酸、石油醚、30-50目筛和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
样本 80℃烘干至恒重，研磨，过 30-50 目筛，称取约 5mg 于 1.5mL EP 管中。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至280nm，冰乙酸调零。
2、操作表（在1.5mL离心管中依次加入下列试剂）：
乙酰化：
| 测定管 | 空白管 |
样本（mg） | 5 | - |
试剂一（μL） | 500 | - |
65℃水浴反应30min。3000g，室温离心5min；去上清，留沉淀； |
试剂二（μL） | 500 | - |
涡旋震荡5min。3000g，室温离心5min；去上清，留沉淀； |
试剂三（μL） | 500 | - |
涡旋震荡5min。3000g，室温离心5min；去上清，留沉淀； |
试剂四（μL） | 500 | 500 |
试剂五（μL） | 20 | 20 |
充分混匀（封口膜密封，防止水分散失）。于80℃水浴锅水浴40min，进行乙酰化。每隔10min 震荡30s，然后自然冷却至室温。 |
试剂六（μL） | 500 | 500 |
充分混匀，于8000g，室温离心10min，取上清待测。 |
测定：（注：由于冰乙酸易挥发，请混匀后立即测定！建议混匀一管测一管）
上清液（μL） | 20 | 20 |
冰乙酸（μL） | 980（参考注意事项） | 980（参考注意事项） |
充分混匀，吸取反应液于1mL石英比色皿中，测定280nm下的吸光值A，记为A测定管、A空白管， 计算ΔA=A测定管-A空白管。空白管只需测1-2次。 |
三、木质素含量计算
木质素含量（mg/g）=ΔA÷ε÷d×V检测÷（V上清×W÷V乙酰化）=2.184×ΔA÷W 木质素的百分含量（%）=木质素含量÷1000×100%=0.2184×ΔA÷W
V乙酰化：乙酰化反应体积，1.02mL；ε：木质素消光系数，23.35mL/mg/cm；d：比色皿光径，1cm；V上清： 上清液体积，0.02mL；V检测：检测体积，1mL；W：样本质量，g；1000：换算系数，1g=1000mg。
注意事项：
1、试剂四有毒性，请操作时做好防护措施，加热前必须用封口膜密封，以防气体溢出。
2、加热过程中有剧烈反应，震荡时轻摇，以免压力过大喷出造成人身伤害。
3、冰乙酸具有强刺激性，建议操作过程全部在通风橱内操作。
4、取上清加冰乙酸步骤根据自己样本乙酰化程度，冰乙酸的用量可调整，保证吸光值在0.1-0.8之间即可，并在公式中参与计算。
5、由于冰乙酸具有挥发性，建议用比色皿进行测定实验。实验混匀后必须立即测定！
