产品组成:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液一 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
提取液二 | 液体 5 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 液体 20 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 60 μL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 24mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 粉剂×1 瓶 | -20℃保存 |
试剂五 | 液体 5 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制:
1、试剂二:液体置于试剂瓶内 EP 管中。临用前按试剂二(V):蒸馏水(V)=10μL:450μL 的比例配制试剂二溶液,现用现配;
2、试剂四:临用前每瓶加入 8 mL 蒸馏水混匀,可分装后-20℃保存,避免反复冻融,-20℃保存 4 周;
3、标准品:临用前加入 1.04 mL 蒸馏水配成 100 μmol/mL 的标准溶液;
产品说明:
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物,与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关, 乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸,同时使NAD+还原生成NADH和H+,H+传递给PMS生成的PMSH2还原MTT生成紫色物质,在570nm处有特征吸收峰。
技术指标:
最低检出限:0.0387 μmol/mL
线性范围:0.039-1 μmol/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
天平、研钵/匀浆器、离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅或者恒温培养箱、乙醇和蒸馏水。操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织:按照质量(g):提取液一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴匀浆后于4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再加入0.15mL提取液二,4℃12000g离心10min 后取上清待测。2、细胞:按照细胞数量(104个):提取液一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);于4℃,12000g离心10min,取0.8mL 上清液,再加入0.15mL提取液二,4℃ 12000g离心10min后取上清待测。
3、血清(浆):取100μL血清(浆)加入1mL提取液一,4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再加入0.15mL 提取液二,12000g离心10min后取上清待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上,波长调至570nm,乙醇调零。
2、标准液的稀释:将100μmol/mL的标准溶液用蒸馏水稀释为1、0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039μmol/mL
的标准溶液待测。
3、加样表:
| 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
样本(μL) | 50 | 50 | - | - |
标准品(μL) | - | - | 50 | - |
蒸馏水(μL) |
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