试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液一 | 液体 45 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
提取液二 | 液体 600 μL×2 支 | -20℃保存 |
提取液三 | 液体 40mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1 瓶 | 常温保存 |
试剂三 | 液体 20 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 粉剂×2 支 | -20℃保存 |
试剂五 | 液体 10 mL×1 瓶 | 常温保存 |
试剂六 | 液体 35 mL×1 瓶 | 常温保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、提取液二：易挥发试剂，用完后盖紧盖儿后及时放回-20℃保存；
2、试剂一：临用前加入 10 mL 试剂三，充分溶解待用；
3、试剂二：临用前加入 10 mL 试剂三，充分溶解待用；
4、试剂四：临用前加入 0.75 mL 双蒸水，充分溶解待用；
5、工作液的配制：临用前根据用量将试剂一、试剂二按 1:1 比例混合，现配现用；
6、标准品：10 mg α-酮戊二酸。临用前加入 684 μL 蒸馏水，配成 100 μmol/mL 标准液。
产品说明：
线粒体异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase，ICDHm），广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，与线粒体基因表达及线粒体其他的功能有关。异柠檬酸脱氢酶在生物体内有两种存在形式，以NAD为辅酶的NAD-依赖型异柠檬酸脱氢酶，和以NADP为辅酶的NADP-依赖型异柠檬酸脱氢酶。
异柠檬酸脱氢酶的主要功能，是在体内三羧酸循环中，催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸，将NAD还原成NADH， 通过测定α-酮戊二酸的生成量，可以计算出线粒体异柠檬酸脱氢酶活力高低。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
低温离心机、可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、称取约 0.3g 组织或收集 1500 万细胞，加入 1.5mL 提取液一和 15μL 提取液二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、4℃，1000g 离心 10min。将上清液移至另一离心管中，4℃，11000g 离心 15min。
3、上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的异柠檬酸脱氢酶（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。
4、在沉淀中加入 600μL 提取液三和 6μL 提取液二，超声波破碎（功率 40%，超声 5 秒，间隔 9 秒，4min），4℃，
10000g 离心 10 min，取上清液用于线粒体异柠檬酸脱氢酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。
二、测定步骤
1、可见分光光度计预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。
2、将标准品用提取液三稀释至0.6、0.3、0.15、0.075、0.0375、0.01875 μmol/mL标准溶液。
3、操作表（在1.5 mLEP管中进行如下操作）：
