酸性蛋白酶（ACP）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 35 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 液体 10mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 50 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 液体 10 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂五 | 液体 15 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂二：临用前加入 10 mL 试剂五，沸水浴中搅拌溶解；
2、标准品：20μmol/mL 标准酪氨酸。
产品说明：
ACP 是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。酸性条件下，ACP 催化酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；钨蓝在680nm 有特征吸收峰，通过测定其吸光度增加，来计算 ACP 活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
研钵/匀浆器、台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、1.5 mL EP 管、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称约0.1g组织，加入1mL提取液，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待测。或直接称取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。
2、试剂一、试剂二和试剂三置于30℃水浴保温30min以上。
3、标准溶液的配制：临用前将20μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25μmol/mL 标准溶液使用，现用现配。
4、样本测定（1.5mLEP管中分别加入下列试剂）
试剂名称（μL） | 对照管 | 测定管 | 空白管 | 标准管 |
粗酶液 | 100 | 100 | | |
提取液 | 100 | 100 |
试剂一 | 200 | |
试剂二 | | 100 |
混匀后30℃水浴保温10min |
试剂一 | | 200 |
试剂二 | 100 | |
混匀后10000rpm 4℃离心10min，取上清 |
上清 | 200 | 200 | | |
蒸馏水 | | | 200 | |
标准品 | | | | 200 |
试剂三 | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
试剂四 | 200 | 200 |
|
