果糖-1,6-二磷酸（FDP）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液一 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
提取液二 | 液体 5 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 液体 20 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 15 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 液体 40 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂二：临用前加入 1mL 蒸馏水，充分溶解后待用，用不完的试剂 4℃保存，4℃保存一周；
2、标准品：临用前加入 1176μL 蒸馏水充分溶解，配制成 50μmol/mL 果糖-1,6-二磷酸标准溶液。
产品说明：
果糖 1,6-二磷酸（fructose-1,6-diphosphate, FDP）是糖酵解过程中的一种重要的中间产物，对多种酶具有调节作用，具有改善细胞能量代谢、增加能量利用、抗心律失常及抗组织过氧化等作用，广泛应用于临床医药。
醛缩酶催化果糖 1,6-二磷酸裂解，产物与 2,4-二硝基苯肼在酸性介质中反应生成 2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈红棕色，在 540 nm 处有特征吸收峰。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照质量（g）：提取液一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.16mL提取液二，4℃，12000g离心10min 后取上清待测。
2、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.16mL提取液二，4℃，12000g离心10min后取上清待测。
3、血清（浆）：取100μL血清（浆）加入1mL提取液一，4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.16mL 提取液二，4℃，12000g离心10min后取上清待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、将50μmol/mL的果糖-1,6-二磷酸标准液用蒸馏水倍比稀释为1.5625、0.78125、0.39、0.2、0.1 μmol/mL的标准溶液备用。
3、样本测定：(在1.5 mL离心管中操作）
试剂名称（μL） | 对照管 | 测定管 | 空白管 | 标准管 |
样本 | 100 | 100 | - | - |
蒸馏水 | - | - | 100 | - |
标准溶液 | - | - | - | 100 |
试剂一 | 220 | 200 | 220 | 200 |
试剂二 | - | 20 | - | 20 |
充分混匀，37℃准确反应2 h |
试剂三 | 200 | 200 | 200 | 200 |
充分混匀，37℃准确反应20 min |
试剂四 | 500 | 500 |
|
