纤维素（CLL）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法

产品组成：

溶液的配制：
1、 提取液一：80%乙醇 200 mL，即将 160 mL 无水乙醇和 40 mL 蒸馏水混合，自备。提供一个 125 mL 空瓶。
2、 标准品：10 mg 葡萄糖。临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解，配成 10 mg/mL 葡萄糖溶液备用，2-8℃保存两周。
3、 工作液的配制：取一瓶试剂一中加入 2.5 mL 试剂二，充分混匀，如较难溶解，可充分震荡或加热搅拌； 用不完的试剂可以 2-8℃保存一周。
产品说明：

纤维素是由β-D-葡萄糖单元以 β-1,4-糖苷键连接而成的直链多聚体，通常与半纤维素、果胶及木质素结合在一起，是植物细胞壁的主要结构成分。以纤维素为原料的产品广泛应用于食品、造纸、塑料、炸药、电工及科研器材等领域。
纤维素在酸性条件下加热能分解成β-D-葡萄糖。在强酸作用条件下利用与蒽酮显色剂测定纤维素含量。
H2SO4 H2SO4

Cellulose β-D-Glucose 5-Hydroxymethylfurfura

5-Hydroxymethylfurfura+Anthrone Furfural Derivatives（620nm）

技术指标：

最低检出限：0.0023 mg/mL
线性范围：0.003125-0.09 mg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰盒、丙酮、浓硫酸、无水乙醇、蒸馏水和EP管。
操作步骤
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、 细胞壁物质（CWM）的提取：
（1） 称取约 0.3g（记为 W1）样本，加入 1mL 提取液一，室温快速匀浆，90℃水浴 20min，冷却至室温，6000g， 25℃离心 10min，弃上清。
（2） 沉淀先后用 1.5mL 提取液一和丙酮各洗两遍（涡旋振荡 2min 左右，6000g，25℃离心 10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁。
（3） 在粗细胞壁中加入 1mL 提取液二（去除淀粉）浸泡 15 小时，6000g，25℃离心 10min，弃上清，将沉淀用蒸馏水清洗两遍（涡旋振荡 2min 左右，6000g，25℃离心 10min，弃上清即可），之后干燥沉淀（60-100℃ 均可），得到细胞壁物质（CWM），称重记为 W2。
2、 纤维素的提取：
（1） 称取烘干的CWM 约 5mg（记为 W3），加入 0.5mL 蒸馏水充分匀浆，匀浆液转移至 EP 管中，用蒸馏水定容至 0.5mL。
（2） 将定容后的匀浆液置于冰水混合物中，缓慢加入 0.75mL 浓硫酸，缓慢混匀，冰水浴中静置 30min。8000g， 4℃离心 10min，取上清液，用蒸馏水稀释 20 倍后待测。
注意：1. 若样本或者干燥后的沉淀质地坚硬，可以先研碎再进行后续步骤
2. 在提取纤维素的过程中，首先，置于冰水浴中的 EP 管需要固定，不要上下左右浮动，一方面保障自身安全，另一方面防止冰水混合物进入 EP 管造成试验误差；再者，加入浓硫酸时，建议枪头伸入样本液面以下， 缓慢加入，防止液面沸腾及样本碳化。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2、 将10mg/mL标准液用蒸馏水稀释为0.09、0.08、0.07、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL的标准溶液备用。
3、 标准品稀释表

实验中每个标准管需300μL 标准溶液。
4、 操作表 (在1.5mL离心管中) ：