乙酰辅酶 A 羧化酶（ACC）活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液一 | 液体 60 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
提取液二 | 液体 0.6 mL×1 支 | -20℃保存 |
试剂一 | 液体 35 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 A | 液体 15 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 B | 粉剂×1 支 | -20℃保存 |
试剂二 C | 粉剂×1 支 | -20℃保存 |
试剂三 | 粉剂×1 瓶 | -20℃保存 |
试剂四 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂五 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂六 | 液体 15 mL×1 瓶 | 常温保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂二：临用前将试剂二 B、试剂二 C 倒入试剂二 A，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；
2、试剂三：临用前加入 6 mL 双蒸水，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；
3、试剂四：临用前加入 15 mL 双蒸水，溶解后 4℃保存一周；
4、试剂五：临用前加入 15 mL 双蒸水，溶解后 4℃保存一周；
5、标准品：10 μmol/mL 标准磷贮备液；
6、提取液的配制：按提取液一：提取液二=990：10（V：V）的比例配制，根据样本量现配现用，禁止将提取液二一次性全部加入提取液一混匀分装待用；
7、工作液（定磷剂）的配制：按 H2O：试剂四：试剂五：试剂六=2:1:1:1 的比例配制，配好的工作液应为浅黄色；若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，工作液应现配现用；
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
产品说明：
乙酰辅酶A羧化酶（Acetyl-CoA carboxylase，ACC）在生物体内催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A，是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。
ACC能够催化乙酰辅酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰辅酶A、ADP和无机磷，钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质，通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定ACC活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、天平、低温离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、漩涡震荡仪、水浴锅、蒸馏水、冰盒、EP管。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参文献）
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液） 进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
2、细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3、血清（浆）：直接测定。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
2、临用前将试剂一、试剂二、试剂三在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）预热10min。
3、将10μmol/mL标准液用蒸馏水稀释为1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL的标准溶液备用。
4、操作表：(在1.5mL离心管中依次加入下列试剂)
a.酶促反应：
试剂名称 | 对照管 | 测定管 |
试剂一（μL） | 450 | |
试剂二（μL） | - | 250 |
试剂三（μL） | - | 200 |
样本（μL） | 50 | 50 |
37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确反应30min后，沸水浴5min（盖紧，以防止水分蒸发散失），冷却后，10000g， 25℃离心5min，取上清。 |
b.定磷反应：
